Synthèse verte en une étape de nanoparticules d'or multifonctionnelles pour l'imagerie et la thérapie tumorale ciblées

Résumé

Les nanoparticules d'or (GNP) ont toujours servi de vecteurs de transport de doxorubicine (DOX) pour diagnostic/thérapie tumorale ; cependant, leur synthèse nécessite préparation GNP par réduction chimique, puis conjugaison DOX/peptides spécifiques : problèmes communs (étapes multiples, coût élevé, temps long, préparation complexe, post-traitement). Ici, nous présentons pour la première fois une stratégie en une étape pour préparer GNP conjugués DOX basé sur la constitution chimique du DOX. De plus, nous préparons des GNP multifonctionnels (DRN-GNP) en une étape grâce aux groupes fonctionnels réducteurs du DOX, peptides RGD et peptides de localisation nucléaire (NLS), ne nécessitant que 30 min. Images diffusion et études MET cellulaires indiquent que DRN-GNP ciblent noyau cellules Hela. Taux inhibition tumorale DRN-GNP par injection tumorale/veine caudée souris nues : 66,7% et 57,7%, significativement supérieurs groupes témoins. Synthèse une étape GNP multifonctionnels économise temps, matériaux, s'aligne chimie verte, base applications grande échelle futur. Résultats : stratégie efficace, DRN-GNP bonne stabilité colloïdale système physiologique ; agent contraste potentiel et vecteur transport DOX efficace diagnostic/thérapie cancer col utérin.

Introduction

Doxorubicine (DOX) : anticancéreux couramment utilisé, chimiothérapie divers cancers (tumeur sanguine maligne, adénocarcinomes, sarcome tissus mous). Cependant, usage prolongé/doses élevées → résistance, nausées, perte cheveux, toxicité aiguë/chronique → insuffisance cardiaque congestive. Nécessaire : vecteur médicament bonne biocompatibilité, haute capacité chargement. Nanomatériaux développés vecteurs DOX : points quantiques, chitosane, nanomatériaux silicium, polymères, nanoparticules fluorescentes, nanomatériaux métalliques. Nanomatériaux or largement utilisés : propriétés chimiques/optiques uniques, faible toxicité, bonne biocompatibilité, capacité modification surface contrôlée. Trois approches conjugaison DOX sur GNP : (1) hydrazine, EDC, agent pH-sensible, système DCC/NHS ; (2) incubation GNP/DOX ≥24 h ; (3) remplacement citrate surface GNP par DOX. Bien que utilisés thérapie tumorale, application limitée par spécificité insuffisante. Groupe El-Sayed : GNP fonctionnalisés DOX, peptides RGD, signaux localisation nucléaire (NLS). Point fort : GNP entrent cellules tumorales endocytose récepteur-médiée RGD, puis noyau via NLS → DOX interfère efficacement synthèse ADN. Mais ≥120 h couplage peptides/médicaments couche par couche sur GNP, chaque processus ≥24 h. Toutes méthodes ci-dessus : problèmes communs (étapes multiples, coût élevé, préparation complexe, post-traitement). Nécessaire : méthode simple/rapide synthèse nanomatériaux or multifonctionnels.

Cet article : stratégie une étape préparation GNP conjugués DOX base constitution chimique DOX (première fois). Méthode commode vecteur transport DOX multifonctionnel pour DOX plus efficace, diagnostic/thérapie tumorale. Différence clé : DOX, peptides RGD, NLS utilisés comme agents réducteurs ET stabilisants pour fabriquer GNP ET conjuguer ces trois substances surface GNP simultanément → DRN-GNP. Travaux antérieurs : RGD/autres peptides réduisent ions or → nanomatériaux or. N-terminal NLS modifiable cystéine-cystéine-tyrosine (CCY) → CCYNLS, réduit ions or tout en conservant effet ciblage NLS. DOX : deux groupes hydroxyles phénoliques forte réductibilité condition basique → peut réduire ions or former GNP. Effet anti-tumor DOX potentiellement non influencé : s'intercale ADN groupe amino carbone 7 + hydroxyle carbone 9. Simultanément, soufre, oxygène, azote peptides/DOX se lient GNP → stabilité colloïdale. Résultats : DRN-GNP fabriqués avec succès, fonctionnent imagerie, diagnostic, thérapie tumorale (Schéma 1). Première fois, à notre connaissance, synthèse GNP multifonctionnels conjugués DOX, RGD, NLS méthode une étape, application diagnostic/thérapie tumorale.

Matériaux et Méthodes

Matériaux

HAuCl₄·4H₂O : Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. Peptides RGD cycliques (séquence arginine-glycine-aspartate-tyrosine-glutamate c(RGDyE)) et hydroxyde sodium : même que réf. [35]. Doxorubicine : Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Peptides CCYNLS (séquence cystéine-cystéine-tyrosine-proline-proline-lysine-lysine-lysine-arginine-lysine-valine, CCYPPKKKRKV) : China Peptides Co., Ltd (Shanghai, Chine). Lignes cellulaires Hela, MCF-7 : Guangzhou Youdi Biological Technology Co. Ltd. FBS, DMEM : GibcoBRL Life Technologies. Kit MTT : Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co. Ltd.

Synthèse DOX-GNP, NLS-GNP, DR-GNP, DN-GNP, DRN-GNP

DOX-GNP : solution DOX (0,2 mg/mL, 1,0 mL) + solution acide chloroaurique (0,86 mM, 1,0 mL) agitation magnétique, NaOH (2 M, 5 µL) ajustement pH. NLS-GNP : CCYNLS (0,5 mM, 1,0 mL) + acide chloroaurique (3,44 mM, 1,0 mL) agitation, NaOH (2 M, 20 µL) pH. DR-GNP : DOX (0,2 mg/mL, 1,0 mL) + RGD (1,0 mM, 1,0 mL) + acide chloroaurique (1,72 mM, 2,0 mL) agitation, NaOH (2 M, 15 µL) pH. DN-GNP : DOX (0,2 mg/mL, 1,0 mL) + CCYNLS (0,5 mM, 1,0 mL) + acide chloroaurique (1,72 mM, 2,0 mL) agitation, NaOH (2 M, 20 µL) pH. DRN-GNP : DOX (0,2 mg/mL, 1,0 mL) + CCYNLS (0,5 mM, 1,0 mL) + RGD (1,0 mM, 1,0 mL) + acide chloroaurique (1,72 mM, 3,0 mL) agitation, NaOH (2 M, 35 µL) pH. Toutes réactions 30 min 100 °C système reflux, pH 10-12. Purification centrifugation 55 000 tr/min 30 min (Optima MAX-TL, Beckman Coulter). Surnageant éliminé, GNP redispersés eau ultrapure.

Caractérisation

Spectres GNP : UV 3150 Spectrophotometer (Shimadzu, Japon), Nicolet Avatar FTIR 330 (Thermo, USA), ESCALab250 XPS conditions analytiques réf. [35]. Images MET : TEM JEM-2100F (JEOL, Japon) 200 kV.

Diffusion Lumière Dynamique et Mesures Potentiel Zêta

Zeta PALS Zeta Potential Analyzer (Brookhaven Instrument Corporation) : DLS GNP (90°, laser état solide λ=670 nm, température ambiante). Équipé électrode AQ-827 : potentiels zêta GNP.

Analyse ICP

Analyse quantitative Au GNP : même que réf. [35].

Stabilité DR-GNP, DN-GNP, DRN-GNP Dispersés PBS, HCl, NaOH, NaCl

100 µL GNP précipités + 500 µL solutions concentrées 0,2 M PBS, 0,5 M HCl, 0,5 M NaOH, 1,0 M NaCl. 12 h plus tard : photos + spectres absorption UV.

Culture Cellulaire

Hela, MCF-7 : incubateur (5% CO₂ air humidifié) 37 °C 24 h. Milieu DMEM 10% FBS. Cellules vivantes comptées plaque comptage cellules.

Essai Cytotoxicité DOX Libre et DRN-GNP

Hela, MCF-7 phase exponentielle → plaques 96 puits ~5×10³ cellules/puits, incubation 24 h. DRN-GNP concentrations 0, 20, 40, 60, 80, 100 µg/mL (DOX correspondant 0,0, 7,8, 15,6, 23,4, 31,2, 39,0 µg/mL) incubées chaque puit 24 h 37 °C. Témoin : PBS seul, viabilité 100%. MTT (20 µL, 5 mg/mL) ajouté chaque puit 37 °C ~4 h. Milieu aspiré, 150 µL DMSO ajouté/puits 10 min dissolution cristaux. Lecteur plaque (Thermo Multiskan Mk3) OD 490 nm. 3 puits/groupe, valeurs moyenne ± écart-type.

Expérience Cytométrie Flux

Hela, MCF-7 phase exponentielle → plaques 12 puits ~5×10⁴ cellules/puits, 24 h. DRN-GNP concentrations finales 0, 20, 40, 60, 80, 100 µg/mL ajoutées chaque puit, 24 h 37 °C. Milieu retiré, trypsine (EDTA) digestion cellules. Trypsine retirée, milieu ajouté, transfert tubes centrifugation. Centrifugation 1000 g 5 min, surnageant éliminé, cellules collectées/comptées PBS. 5-10×10⁴ cellules autre tube, centrifugation 1000 g 5 min. Surnageant retiré, 100 µL tampon AnnexinV ajouté. 5 µL AnnexinV-FITC + 5 µL iodure propidium ajoutés, mélange doux. Incubation 15 min obscurité température ambiante (20-25 °C). Test cytomètre flux (BD Accuri C6).

Imagerie Diffusion Champ Sombre Optique et MET Culture Cellulaire

Hela, MCF-7 implantées lame culture 8 trous ~7×10³ cellules/puits. DRN-GNP ajoutés chaque puit concentration finale 35 µg/mL. 24 h incubation, élimination GNP physiques/adsorbés libres rinçage 3× PBS. Fixation 4% paraformaldéhyde 20 min, quelques gouttes glycérol, scellage lame autre lamelle. Microscope champ sombre (Zeiss Imager Z1) ×200 grossissement mode réflexion. Temps exposition champ clair/sombre 5 V : 1 ms / 400 ms.

Études MET : Hela, MCF-7 incubées DRN-GNP (35 µg/mL) 24 h flacon culture. Après incubation/aspiration mélange milieu/DRN-GNP, rinçage 3× PBS, digestion trypsine. Transfert tube centrifugation peu volume DMEM. Centrifugation 1500 tr/min 10 min, aspiration DMEM, 3% glutaraldéhyde (40× volume matériaux) ajouté fixation cellules fond tube >1 h. Fixation supplémentaire 1% tétroxyde osmium 1 h, déshydratation éthanol, inclusion Spurr (Sigma-Aldrich). Prélèvement, coupes, coloration acétate uranyle/ citrate plomb, montage grille cuivre (300 mailles). Spécimens MET FEI TECNAI-12 (120 kV).

Expériences Animales

Sujets Animaux

Souris nues femelles athymiques : Centre Expérimental Animal Université Médicale Sud (Guangzhou, Chine) test thérapie tumorale in vivo. Expériences conformes Règles Gestion Animaux Ministère Santé Chine (Doc NO. 55, 2001) et directives Soins/Utilisation Animaux Laboratoire Université Pharmaceutique Chine.

Efficacité Thérapeutique DOX Libre et Conjugués Souris Porteuses Tumeur

36 souris nues (5-6 semaines, 16-18 g) divisées 6 groupes aléatoirement. Injection sous-cutanée cellules Hela (5×10⁶ cellules PBS) fosse axillaire droite. 5 jours plus tard : groupe témoin injection veine caudée sérum physiologique (0,154 mol/L, 0,2 mL). Groupes DOX libre, DR-GNP, DN-GNP, DRN-GNP : injection veine caudée. Comparaison efficacité anti-tumorale DRN-GNP injection intraveineuse vs injection tumorale : groupe injection quantité égale DRN-GNP site tumeur. Cinq groupes : dose 0,3 mg/kg équivalent DOX libre/conjugué/souris. Injection veine caudée/tumeur 1 fois/jour. Poids corporel/volume tumeur surveillés quotidiennement 14 jours. Tumeurs 6 groupes excisées analyse pathologique après 14 jours traitement. Tumeurs/organes internes (cœur, foie, rate, poumon, rein) isolés, fixés formol neutre tamponné 10%, inclus paraffine. Coupes tumorales coloration H&E, microscope optique Olympus.

Résultats et Discussion

Synthèse et Caractérisation DOX-GNP, NLS-GNP, DN-GNP, DR-GNP, DRN-GNP

Synthèse DOX-GNP : ajout NaOH solution mixte DOX/acide chloroaurique → couleur orange→violet pâle→vin rouge 100 °C reflux agitation magnétique 1 min = formation DOX-GNP. Réductibilité DOX très forte : deux groupes hydroxyles phénoliques (carbone n°6 et n°11) forte réductibilité condition basique. Réaction 30 min jusqu'à couleur stable.

Éviter confusion couleur rouge-orangé DOX / rouge vin GNP : preuves spectres absorption UV (Figure 1a). DOX : pic caractéristique ~485 nm, pic 530 nm ; pic 480 nm disparu spectre produit, pic résonance plasmon surface (SPR) caractéristique GNP 520 nm apparu. Formation GNP pas complètement déterminée entre 520 nm GNP et 530 nm DOX. Centrifugation haute vitesse : GNP précipités, DOX non. Précipité violet fond tube centrifuge (encart Fig 1a 3-4), DOX pas (encart Fig 1a 1-2).

DOX fluorescence rouge irradiation UV 365 nm ; fluorescence disparue après synthèse GNP. Deux raisons : (1) coefficient extinction GNP très fort, éteignent fluorescence molécules proches surface (<5 nm) ; distance >20 nm → champ plasmonique trop loin éteindre signal. (2) Groupe fluorescent DOX détruit après rôle agent réducteur. Figure 1c : nombre pics absorption IR DOX-GNP significativement < DOX, mais nombreuses caractéristiques DOX conservées : pics 2910 cm⁻¹ (C-H étirement), 1631 cm⁻¹ (carbonyl étirement), 1114 cm⁻¹ (C-O, C-N étirement), 867 cm⁻¹ (N-H, C-H pliement hors plan). Pics représentatifs DOX aussi spectres DOX-GNP = DOX lié avec succès DOX-GNP. Pic 1214 cm⁻¹ (C-O étirement hydroxyle phénolique) disparu spectres DOX-GNP. Groupe phénolique réduit ions Au→GNP, transporté vers groupe carbonyl. Spéculation : effet DOX non affecté (intercale ADN groupe amino C7 + hydroxyle C9).

Taille DOX-GNP ~6 nm MET (Fig 1b). Ratio Au(I) calculé 31,93% spectre XPS DOX-GNP (Fig 1d) = assez élevé stabilité colloïde. Cependant, dépôt DOX-GNP dispersé 0,2 M PBS centrifugation haute vitesse après élimination surnageant : couleur violet noir, flocons insolubles visibles = stabilité DOX-GNP pas excellente environnement haute concentration sel. Explication : DOX un seul groupe amino, pas groupe sulfhydryle = insuffisant connexion surface GNP via liaisons Au-S, Au-N. Efforts supplémentaires si DOX-GNP agent contraste/matériau anti-tumor imagerie/thérapie.

DRN-GNP synthétisés DOX, peptides RGD, NLS comme agents réducteurs/stabilisants. RGD : cible spécifique cellules tumorales surexprimant intégraine α_vβ₃ ; NLS : cible spécifique noyau. Figure 2a : spectres UV-Vis DOX-GNP, NLS-GNP, DRN-GNP ; pics absorption plasmon surface 520-530 nm. Inset : GNP couleur rouge vin brillant. Images MET (Fichier supplémentaire 1: Figure S1) : tailles NLS-GNP, DRN-GNP ~10 nm et 5 nm, distribution uniforme, pas coagulation évidente.

Validation synthèse NLS-GNP, DRN-GNP : spectres FTIR peptides NLS et GNP Figure 2c. Pics FTIR peptides NLS trouvés spectres NLS-GNP, DRN-GNP : étirement C-H (2840-2972 cm⁻¹), étirement C=O (1630-1700 cm⁻¹), pliement plan =C-H (1300-1475 cm⁻¹) = peptides CCYNLS conjugués surface GNP. Pic vibration squelette benzène tyrosine terminal peptide NLS 1529 cm⁻¹ et pic étirement C-O hydroxyle phénolique 1193 cm⁻¹ disparus spectres IR NLS-GNP, DRN-GNP = squelette benzène tyrosine terminal transporté structure quinone après rôle agent réducteur.

Centrifugation DRN-GNP haute vitesse, surnageant quasi incolore, test réactifs restants UV-Vis Figure 2b. Pics UV RGD/NLS peptides : résidus tyrosine, pic 275 nm. Condition alcaline : hydroxyle phénolique → ions oxygène négatifs, densité électronique cycle benzène augmentée, pic décalé rouge 292 nm. Pas pic caractéristique spectre UV-Vis surnageant DRN-GNP = peptides ont réagi. DOX : 3 pics absorption 450-600 nm, surnageant DRN-GNP pas ces pics. Pas DOX surnageant (couleur brun clair vs DOX condition basique violet transparent clair). Conclusion : trois matériaux réagissent quasi complètement. DR-GNP, DN-GNP expliqués de même (Fichier supplémentaire 1: Figure S2).

Spectroscopie XPS valence Au NLS-GNP, DRN-GNP Figure 3a,b. Deux pics énergies liaison ~83,6 eV et ~87,0 eV = émission photoélectrons Au 4f_7/2 et 4f_5/2. Position Au 4f_7/2 ~84,0 eV deux GNP. NLS-GNP : déconvolution Au(0) (83,5 eV) et Au(I) (84,1 eV), ratio aires 57%/43%. DRN-GNP : Au(0) (83,6 eV), Au(I) (84,4 eV), ratios 62%/38% = proportion Au(I) plus élevée. Charge forme complexes Au(I)-S → stabilité colloïdale GNP. Intéressant : trois types S identifiés spectres XPS NLS-GNP, DN-GNP, DRN-GNP (Fichier supplémentaire 1: Figure S3). Courbes bleue/noire = états oxydation soufre, violette = liaison S-H, verte = liaison Au-S. Formation liaison Au-S = peptides NLS conjugués surface ces trois GNP.

Pics N 1s, C 1s, O 1s XPS : peptides/DOX attachés GNP (Fichier supplémentaire 1: Figure S4). Spectres XRD (Fichier supplémentaire 1: Figure S5) : structure cristalline cubique faces centrées = 4 pics 38,2°, 44,5°, 64,7°, 77,8° plans (111), (200), (220), (311).

Stabilité DRN-GNP

DLS et potentiels zêta 5 GNP Tableau 1 : tailles hydrodynamiques > MET (molécules hydratées autour cœur GNP hydrosolubles). Potentiels zêta négatifs (groupe carboxyle surface GNP). Solution GNP bonne stabilité colloïdale |potentiel zêta| > 30 mV ; plus grande valeur absolue = meilleure stabilité. Tous possèdent bonne stabilité colloïdale Tableau 1. Comparaison : NLS-GNP potentiel zêta le plus élevé = surface pleine peptides NLS → liaisons Au-S fortes via groupe thiol. |Potentiel zêta| DOX-GNP ~30 mV = cohérent instabilité DOX-GNP PBS mentionné. Données spectrales Fichier supplémentaire 1: Figure S6.

Changements bandes résonance plasmon surface (SPR) caractéristiques GNP déterminent agrégation GNP par spectrométrie UV-Vis. Spectres UV-Vis mesurés + photos DRN-GNP (Figure 3c) dispersés sel élevé (1 M NaCl, 0,2 M PBS), acide fort (0,5 M HCl), base forte (0,5 M NaOH). Ni changement couleur ni décalage UV-Vis observé conditions rudes sauf HCl : couleur violet léger, pic UV décalé rouge ~20 nm = légère coagulation GNP. Raison : stabilité colloïdale GNP chargés négativement affectée condition acide forte, mais pas influencée PBS neutre/environnement alcalin. Conclusion : DRN-GNP hautement stables sel élevé/alcalin = attendus imagerie cellulaire in vivo / thérapie anti-tumorale in vivo.

Imagerie Diffusion Champ Sombre Plasmonique Cellules Tumorales et MET Cellulaire

Imagerie ciblée cellules tumorales DRN-GNP : Hela groupe test, MCF-7 groupe contrôle. Raisons : Hela surexpriment intégraine α_vβ₃ ; MCF-7 non = pas liaison spécifique RGD = bon contrôle. Prise DRN-GNP deux lignées après incubation 24 h concentration finale 35 µg/mL évaluée microscopie fluorescence verticale mode champ sombre. Cellules sans GNP : pas diffusion plasmonique (Fig 4 A-Hela, 5C-MCF-7). Hela + DRN-GNP : signaux diffusion GNP fortement localisés noyau (Figs 4b, 5e). MCF-7 + DRN-GNP : diffusion à peine visible même si peu GNP entrent cellules par effet perméabilité/rétention passif amplifié (EPR) (Figs 4d, 5f). EPR : phénomène tumeurs solides différences anatomiques/pathophysiologiques tissus normaux. Angiogenèse → densité vasculaire élevée tumeurs, larges espaces cellules endothéliales vaisseaux tumoraux, extravasation/rétention sélective macromolécules médicaments. Donc pas clairement détectées mêmes conditions. Résultats : endocytose Hela récepteur-médiée facilitée peptides RGD surface GNP. Peptides NLS maintiennent activité ciblage noyau spécifique. DRN-GNP = agent contraste potentiel imagerie ciblée tumorale.

Tableau 2 : rapports valeurs moyenne grise densitométrique cellules/arrière-plan même image, corrélation positive quantités DRN-GNP internalisées. Rapports cellules PBS + MCF-7 ≈ 1,0 = luminosité cellules ≈ arrière-plan. Rapport Hela + DRN-GNP = 4,80 = DRN-GNP ciblent spécifiquement entrent cellules tumorales surexprimant α_vβ₃.

Confirmation internalisation récepteur-spécifique DRN-GNP : prise cellulaire DRN-GNP Hela/MCF-7 technique MET (Figure 5). Grande quantité DRN-GNP localisée noyau/cytoplasme Hela α_vβ₃-positives (Fig 5 A₁-A₃). Quantité négligeable particules cytoplasme MCF-7 α_vβ₃-négatives (Fig 5 B₁-B₂) = accumulation possible effet EPR passif. Régions noires continues haut contraste noyau MCF-7 = acétate uranyle coloration noyau, différentes particules granulaires noyau Hela. Images MET cohérentes imagerie champ sombre = peptides RGD/NLS surface GNP facilitent ciblage noyau Hela par DRN-GNP. DRN-GNP = agent contraste parfait imagerie/diagnostic ciblé tumoral.

Évaluation Efficacité Thérapeutique Cellulaire

Évaluation efficacité thérapeutique DOX/DRN-GNP niveau cellulaire : MTT viabilité Hela/MCF-7 traitement 24 h deux échantillons. DRN-GNP inhibition ~même effet tuant ~70% cellules même concentration DOX (39,0 µg/mL, Fig 6A,B). Conformément MTT, concentration DRN-GNP 40 µg/mL : nombre/état cellules Hela/MCF-7 relativement bons → 35 µg/mL concentration adaptée imagerie. Concentration DRN-GNP 60 µg/mL (Fig 6C₃) : nécrose Hela évidente. 100 µg/mL : réduction nette nombre cellules, changement morphologique clair nécrose. Même concentration DOX conjugué ~même efficacité anti-tumorale DOX libre. Résultats : DRN-GNP = agent contraste + bon système administration médicament.

Cytométrie flux Figure 7 : efficacité anti-tumorale DRN-GNP. Viabilité Hela exposées DRN-GNP différentes concentrations cytométrie flux essais. Deux modes mort cellulaire : apoptose, nécrose mesurés colorants AnnexinV-FITC, iodure propidium (PI) (Fig 7). Similaire MTT : DRN-GNP induisent nécrose dose-dépendante. Cellules nécrotiques 8% sans DRN-GNP ; 100 µg/mL → 23,84% nécrose = DRN-GNP tuent efficacement Hela. Différence MTT/cytométrie = différence nombre cellules/méthodes.

Évaluation Thérapie DRN-GNP Souris Porteuses Tumeur

Détermination effet thérapeutique combiné DRN-GNP cellules tumorales in vivo : évaluation effet anti-tumoral DRN-GNP souris porteuses tumeur injection intraveineuse long terme médicaments. Groupe sérum physiologique et médicaments DOX libre, DR-GNP, DN-GNP injection intraveineuse = groupes témoins, concentration DOX conjugué = DOX libre. Tailles tumeurs groupes DRN-GNP évidemment plus petites que sérum, DOX, DN-GNP, DR-GNP (Figure 8a). Volume tumeur/poids corporel surveillés tous 2 jours. Variation significative volume/poids tumeur tous groupes Figure 8d,f : volumes/poids tumeurs DN-GNP, DR-GNP < DOX libre mais > DRN-GNP (moins activité ciblée). Cause : DOX molécules petites, pas ciblage, demi-vie courte in vivo → élimination rapide. DRN-GNP : forte stabilité système sanguin, longue demi-vie, haute capacité ciblage → ciblent site tumeur → effet anti-tumoral DOX. Entre DRN-GNP injection intraveineuse vs tumorale : efficacité anti-tumorale seconde > première (médicaments pas circulation sanguine complexe foyer). Taux inhibition DOX <50%, taux tous DOX-GNP conjugués >50%, jusqu'à 66,7% et 57,7%. Colorations HE : certain dommage organes foie groupe DRN-GNP injection intraveineuse (Figure 9). Bio-toxicité DOX, DR-GNP, DN-GNP souris porteuses tumeur évaluée analyse histologique. Figure 8b : volume cellules tumorales groupe sérum physiologique comparativement plus grand, cellules tumorales plus figures mitoses. Résultats : effet inhibition tumoral DRN-GNP meilleur parmi GNP. DRN-GNP = système administration DOX parfait thérapie tumorale.

Conclusion

En résumé, nous avons développé avec succès une méthode une étape préparation DRN-GNP multifonctionnels ~30 min. GNP appliqués avec succès imagerie ciblée tumorale et thérapie tumorale in vitro/in vivo. Succès montre : utilisation pleine capacité réductrice/stabilisante DOX, peptides RGD, CCYNLS → synthèse GNP simple/efficace. Important : DRN-GNP synthèse une étape conservent bonne stabilité colloïdale système physiologique, peptides surface conservent capacité ciblage, DOX conserve capacité anti-tumorale. Première fois, à notre connaissance, synthèse GNP multifonctionnels conjugués DOX, RGD, CCYNLS méthode une étape, application imagerie, diagnostic, thérapie tumorale. Stratégie alignée chimie verte, base applications grande échelle futur proche. Attendu : nouveau chemin synthèse une étape nanomatériaux multifonctionnels imagerie/thérapie tumorale.