Administration ciblée d'artémisinine via MOF enrobé Fe(II)-acide tannique potentialise la ferroptose dans le cancer du sein triple négatif

Résumé

La suppression du développement tumoral par induction de la ferroptose offre un remède potentiel pour le cancer du sein triple négatif (CSTN), sensible au déséquilibre oxydatif intracellulaire. Récemment, l'artémisinine (ART) et ses dérivés ont été étudiés comme agents anticancéreux potentiels pour cancers très agressifs via induction de ferroptose par clivage du pont endopéroxyde médité par le fer. En raison de sa faible solubilité aqueuse et de la teneur limitée en fer intracellulaire, son application en thérapie antitumorale reste difficile. Nous avons développé un nanovecteur fournisseur de fer pour l'ART basé sur l'acide tannique (AT) et l'ion ferreux (Fe(II)) enrobés sur le cadre imidazolate zéolitique-8 (ZIF) encapsulant l'ART (AT-Fe/ART@ZIF) par auto-assemblage piloté par coordination. Les expériences de libération montrent que l'ART n'est pratiquement pas libérée à pH 7,4, tandis que 59 % est libérée à pH 5,0 après 10 h, démontrant une excellente libération déclenchée par pH. Parallèlement, un niveau élevé de ROS et MDA intracellulaires, accompagné d'une diminution de GSH et GPX4, montre que ce nano-système nouvellement développé potentialise markedly la ferroptose. Comparé à la monothérapie, les expériences d'inhibition tumorale in vitro et in vivo démontrent une efficacité supérieure de suppression tumorale de AT-Fe/ART@ZIF. Ce travail fournit une nouvelle approche pour potentialiser la puissance des nanomédecines ferroptotiques et de nouvelles orientations pour la thérapie du CSTN.

Introduction

La ferroptose, sous-type récemment découvert de mort cellulaire, entraîne l'accumulation de lipides hydroperoxydes fer-dépendants (LPO), endommageant la structure et l'intégrité cellulaires. Des preuves émergentes suggèrent que l'activation de la ferroptose par plusieurs petites molécules est une approche efficace de suppression tumorale dans divers modèles expérimentaux de cancer, créant de grandes attentes pour la ferroptose comme nouvelle thérapie anticancéreuse. Le cancer du sein triple négatif (CSTN) est le sous-type le plus agressif, dépourvu de thérapies ciblées, souvent associé à récidive, métastases à distance et résistance aux thérapies. Des études antérieures ont souligné que l'antiporteur xCT cystine/glutamate est hautement exprimé dans de nombreuses cellules CSTN, jouant un rôle clé dans le maintien des niveaux de glutathion (GSH) et de l'équilibre redox. La réduction du GSH intracellulaire rend les cellules CSTN sensibles à la ferroptose, tuant les cellules tumorales. Notamment, la ferroptose peut aussi contourner la résistance du CSTN à l'apoptose programmée classique. Par conséquent, stratégies ou médicaments basés sur l'induction de ferroptose ont un potentiel thérapeutique pour le traitement clinique du CSTN réfractaire.

L'artémisinine (ART), lactone sesquiterpénique contenant un groupe peroxyde, isolée de la plante chinoise traditionnelle Artemisia annua, a démontré une activité antitumorale souhaitable sur multiples lignées cellulaires cancéreuses. Des preuves croissantes montrent que les cellules cancéreuses contiennent significativement plus de fer intracellulaire que les cellules normales, tandis que le clivage du pont endopéroxyde médité par le fer permet à l'ART de provoquer sélectivement la mort cellulaire dans multiples lignées cancéreuses. L'activité antitumorale fer-dépendante a attiré une attention croissante sur la ferroptose régulée par l'ART. Mécanistiquement, l'ART induit la dégradation lysosomale de la férritine de manière indépendante de l'autophagie, augmentant les niveaux de fer ferreux et sensibilisant les cellules à la ferroptose.

Cependant, si l'ART induit la ferroptose dans le CSTN reste flou. De plus, facteurs comme la faible solubilité aqueuse et l'insuffisance de fer ferreux intracellulaire limitent son application antitumorale. Les nanocomsplexes d'ART sont attendus comme systèmes prometteurs d'administration de nanomédecines basées sur l'ART. Ces dernières années, les cadres métalliques-organiques (MOF), matériaux poreux polymères, attirent l'attention pour leurs grandes tailles de pores, surfaces apparentes élevées et absorption sélective de petites molécules. En tant que représentant des MOF, le cadre imidazolate zéolitique (ZIF-8) est largement utilisé dans le développement de nanomédecines avec réponsivité pH, forte charge de médicament et bonne biocompatibilité. De plus, la capacité d'incorporer une surface ajustable sur MOF permet de contrôler les propriétés de surface et de conférer des multifonctionnalités. L'auto-assemblage supramoléculaire d'un enrobage de coordination métal-phénol sur la surface MOF a récemment suscité l'intérêt pour ses propriétés désirables : désassemblage réactif aux stimuli, stabilité colloïdale, biocompatibilité. Les matériaux de coordination métal-phénol sur MOF pourraient être un véhicule idéal pour administrer l'ART hydrophobe.

Inspirés par cela, nous avons développé un nanosystème à enrobage de coordination ion ferreux-acide tannique sur ZIF-8 encapsulant l'ART (AT-Fe/ART@ZIF) pour réguler la ferroptose dans les cellules CSTN, schématisé Figure 1. Le ZIF-8 a été choisi comme nanovecteur pour encapsuler l'ART grâce à sa bonne biocompatibilité et libération pH-réactive. L'enrobage de coordination Fe(II)-AT a été immobilisé sur la surface d'ART@ZIF pour stabilité de dispersion et apport d'ions ferreux (Fe(II)). Suite à l'internalisation du nanosystème dans les cellules, la dégradation acide des véhicules faciliterait la libération de l'ART et l'accumulation de Fe(II). L'augmentation des niveaux de Fe(II) intracellulaires décomposerait l'ART en radicaux par clivage du pont endopéroxyde fer-médité, potentialisant markedly les effets de ferroptose. En conclusion, la découverte de la ferroptose médiate par AT-Fe/ART@ZIF offre de nouvelles perspectives pour le développement de traitements novateurs contre le CSTN.

Matériaux et méthodes

Réactifs

Artémisinine (99 %), 2-méthylimidazole (98 %), nitrate de zinc (ZnNO₃ ; 98 %), AT (98 %), sulfate ferreux (FeSO₄ ; 98 %), méthanol anhydre fournis par Aladdin-Reagent Co. Ltd (Shanghai, Chine).

Fabrication des nanoparticules AT-Fe/ART@ZIF

Pour ART@ZIF : 200 mg ART dissous dans 1 mL méthanol anhydre, 2 g 2-méthylimidazole (solvant 8 mL méthanol absolu) ajoutés lentement sous agitation magnétique. 0,2 g nitrate de zinc (solvant 1 mL méthanol absolu) ajouté lentement. Volume final ajusté à 15 mL, agitation 10 min pour solution blanc clair. Centrifugation 10 000 tr/min, échantillon lavé 3× méthanol. Surnageant pour dosage ART, précipité lyophilisé pour usage ultérieur.

Pour AT-Fe/ART@ZIF : solution AT (40 mg/mL eau déionisée, 2 mL) ajoutée lentement à solution ART@ZIF (10 mg/mL, 4 mL). Agitation 20 min, puis 5 mg/mL FeSO₄ ajouté lentement. Agitation répétée 30 min → solution pourpre foncé. Précipité collecté par centrifugation 10 000 tr/min, lavé 3× eau déionisée, lyophilisé pour obtenir AT-Fe/ART@ZIF.

Caractérisation

MET (JEM-1230 ; JEOL, Tokyo, Japon) pour morphologie et composition élémentaire. Diffusion dynamique de la lumière et potentiel zêta (DLS ; Zetasizer Nano, Malvern Instruments, Malvern, UK) pour taille et stabilité électrique. Spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (VERTEX 70 ; Bruker, Brême, Allemagne) et analyse thermogravimétrique pour composition. Spectroscopie photoélectronique X (XPS) sur PHI 5000 Versa Probe III (Physical Electronics). Composition élémentaire par EDX (Carl Zeiss Model: Neon-40).

Mesure de l'efficacité d'encapsulation et capacité de charge

Chromatographie liquide haute performance (HPLC) (Agilent 1200 ; Agilent Technologies, Santa Clara, CA) pour doser ART dans le surnageant. Charge et efficacité d'encapsulation :
Charge (%) = (quantité réelle ART encapsulée dans NP) / (quantité NP) × 100 %
Efficacité encapsulation (%) = (quantité réelle ART encapsulée) / (quantité initiale ART utilisée) × 100 %

Libération in vitro et réponse pH des nanoparticules AT-Fe/ART@ZIF

Membrane de dialyse traitée enveloppant 2 mg nanoparticules placée dans 50 mL tampon phosphate (PBS) pH 7,4 et 5,0 respectivement, agitation continue 37 °C. Solution externe échantillonnée à 15, 30, 45 min, 1, 2, 4, 6, 8, 10 h. Teneur en ART mesurée par HPLC.

Culture cellulaire

Lignées MDA-MB-231 et L929 de l'American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). Culture 37 °C, 5 % CO₂, humidité, milieu RPMI-1640 (Solarbio, Pékin, Chine) supplémenté 10 % sérum fœtal bovin (Cyclone, Utah, USA), 100 µg/mL pyruvate de sodium, pénicilline, streptomycine (Solarbio, Pékin, Chine).

Test de cytotoxicité cellulaire in vitro

Viabilité par test MTT (3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium bromure) selon procédures littéraires. Cellules MDA-MB-231 et L929 en plaques 96 puits (5 000 cellules/puits), incubation 24 h. Milieu remplacé par 100 µL/puits milieu sans sérum avec PBS et différentes concentrations d'ART, AT-Fe/ZIF, AT-Fe/ART@ZIF, désoxamine (DFO), Z-VAD-FMK, ferrostatin-1 (Fer1). 48 h plus tard, 10 µL MTT (5 mg/mL) ajouté, incubation 4 h. Absorbance mesurée par lecteur enzymatique automatique (BioTek Instruments Inc., USA). Résultats en % viabilité.

Test de coloration Calcein-AM

Cellules MDA-MB-231 en plaques 24 puits (2 × 10⁴ cellules/puits), incubation 24 h. Traitement par différentes concentrations AT-Fe/ART@ZIF 24 h. Après élimination milieu, coloration Calcein-AM (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Chine) dans obscurité 4 °C 20 min, observation microscope fluorescence inversé (Olympus, Tokyo, Japon).

Cytométrie de flux pour apoptose

Cellules MDA-MB-231 en plaques 6 puits (2,5 × 10⁵ cellules/puits). Après traitement PBS, ART, AT-Fe/ZIF, AT-Fe/ART@ZIF 24 h. Cellules centrifugées, collectées. Double coloration iodure de propidium et Annexin-V (Kit Annexin V-FITC ; Beckman Coulter, Marseille, France), détection par cytométrie de flux.

Détermination in vitro des espèces réactives de l'oxygène (ROS)

Contenu ROS par sonde fluorescente ROS (dichloro-dihydro-fluorescein diacétate DCFH-DA, Beyotime Biotechnology, Shanghai, Chine). Cellules MDA-MB-231 en plaques 6 puits (2,5 × 10⁵ cellules/puits), incubation 24 h. Milieu éliminé, cellules traitées : témoin blanc (milieu sans sérum), témoin positif, groupe expérimental (différentes concentrations nanoparticules). Incubation 8 h 37 °C, 0,1 % DCFH-DA ajouté 30 min. Cellules non-réactives éliminées PBS, observation microscope fluorescence inversé (Olympus, Tokyo, Japon).

Dosage malondialdéhyde (MDA) et GSH

Kit dosage MDA (méthode TBA ; Jiancheng Bioengineering, Nanjing, Chine) et kit GSH (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Chine) pour niveaux intracellulaires MDA et GSH. Après traitement PBS, ART, AT-Fe/ZIF, AT-Fe/ART@ZIF, cellules MDA-MB-231 collectées, comptées. Contenu intracellulaire MDA et GSH déterminé selon instructions kits.

Analyse Western Blot

Cellules MDA-MB-231 traitées par différentes nanoparticules lysées par tampon RIPA. Après dosage protéines, séparation par gel SDS-PAGE 10 %, transfert sur membrane nitrocellulose. Blocage 1 h par solution BSA 0,5 %. Incubation 24 h 4 °C avec anticorps primaires. Rinçage TBST, incubation 2 h température ambiante avec anticorps secondaires. Après lavage, révélation chimiluminescente, imagerie gel.

Expérience antitumorale in vivo

Toutes expériences animales approuvées par Comité d'éthique Université médicale Weifang. Souris nues femelles saines (4 semaines ; 13–17 g ; Vital River, Pékin, Chine) injectées 5 × 10⁶ cellules MDA-MB-231 dans 150 µL PBS. Quand volume tumeur 70–120 mm³, souris randomisées en 4 groupes. Chaque groupe traité séparément : PBS, ART (20 mg/kg), AT-Fe/ZIF (80 mg/kg), AT-Fe/ART@ZIF (100 mg/kg). Injection intrapéritonéale tous les 3 jours. Après 14 jours, toutes souris euthanasiées. Tissus tumoraux et organes importants collectés pour coloration hématoxyline-éosine.

Analyse statistique

Toutes expériences répétées au moins 3×. Analyse statistique logiciel SPSS version 22.0 (IBM Corp., Armonk, USA). Résultats en moyenne ± écart-type. p < 0,05 significatif.

Résultats et discussion

Caractérisation des nanoparticules AT-Fe/ART@ZIF

D'abord, nanoparticules ART@ZIF synthétisées à température ambiante depuis méthanol, acétate de zinc, 2-méthylimidazole, ART selon procédures littéraires. Films supramoléculaires métal-polyphénol stables formés rapidement autour des matrices ART@ZIF par vortexage AT et ions ferreux. Comparé aux nanoparticules magnétiques rapportées, AT-Fe/ART@ZIF préparé par auto-assemblage formant membrane AT-Fe sur surface MOF sans réaction chimique dure ni hydrothermale. Surtout, AT-Fe/ART@ZIF peut être déclenché par pH bas pour libérer ART et Fe(II), catalysé par l'endopéroxyde d'ART générant radicaux libres centrés carbone, potentialisant markedly la ferroptose. Efficacité d'encapsulation (HPLC sur surnageant première centrifugation) = 66,7 %. Charge ART calculée = 11,4 %. Selon spectroscopie FTIR (Fig. 2a), pics caractéristiques ART : liaison carbonyle 1738 cm⁻¹, pont peroxy 724 cm⁻¹ observés dans AT-Fe/ART@ZIF, confirmant encapsulation réussie. Analyse thermogravimétrique : ART disparaît complètement ~400 °C (Fig. 2b). Comparé AT-Fe/ZIF, ART représente 7,1 % poids total AT-Fe/ART@ZIF, cohérent HPLC.

MET : ZIF-8 et ART@ZIF configuration hexagonale uniforme, taille ~100 nm (Fig. 3a,b). AT-Fe/ART@ZIF configuration sphérique, taille 150 nm. Structure cœur-coquille évidente vs ART@ZIF complet, membrane AT-Fe ~30 nm (Fig. 3a). Cartographie élémentaire par zone : périphérie AT-Fe/ART@ZIF entourée par Fe, confirmant enrobage Fe(II)-AT (Fig. 3b). XPS : spectre large AT-Fe/ART@ZIF (Fichier sup. 1: Fig. 1s). Pics majeurs ~285, 408, 531, 737, 1036 eV → C 1s, N 1s, O 1s, Fe 2p, Zn 2p, confirmant nanocomposite. Cartographie EDS (Fichier sup. 1: Fig. 2s) : pics C, N, O, Fe, Zn concordants XPS. En augmentant Fe(II), diamètre hydrodynamique AT-Fe/ART@ZIF augmente (Fichier sup. 1: Fig. 3s). Pour confirmer enrobage, potentiel zêta mesuré : formation couche AT-Fe(II) sur ART@ZIF déplace potentiel zêta de +21 mV à −19,5 mV (nature acide AT) (Fichier sup. 1: Fig. 4s). Selon littérature, groupes polyphénols abondants AT confèrent capacité d'enrobage et coordination avec ions métaux transition (Fe, Zn) formant complexe métal-phénol. Quand Zn²⁺ et Hmim mélangés, nombreux Zn²⁺ se coordonnent surface ART@ZIF → zêta +21 mV. Groupes phénols AT (pKa 8,5) déprotonés négativement interagissent avec Zn²⁺ positif, favorisant croissance film AT-Fe sur surface ART@ZIF. Pour administration médicaments, stabilité porteurs cruciale. Stabilité démontrée par dispersion PBS une semaine : taille désirable et stabilité temporelle (Fichier sup. 1: Fig. 5s).

Libération et cytotoxicité AT-Fe/ART@ZIF in vitro

Étude libération ART sous conditions neutre et acide. Fig. 4a : conditions acides → libération rapide ~58 % ART en 1 h. Conditions neutres → libération lente quantité minime. De plus, lors traitement solution externe membrane dialyse par NaOH, groupe pH 5,0 produit précipité blanc considérable, absent groupe pH 7,4. Selon hypothèse, précipité = hydroxyde de zinc formé par dissociation ions zinc et alcali des nanoparticules sous conditions acides. Collectivement, preuves montrent capacité dissociation nanoparticules sous conditions acides.

Dans design AT-Fe/ART@ZIF, structures AT-Fe(II) et ZIF s'abllatent pour libérer ART et Fe(II) encapsulés sous conditions acides microenvironnement tumoral. L'augmentation Fe(II) intracellulaire décompose ART en radicaux par clivage pont endopéroxyde fer-médité, potentialisant ferroptose. Tests MTT pour cytotoxicité nanosystème cellules MDA-MB-231 et L929. Comparé ART, AT-Fe/ART@ZIF cytotoxique plus fort sur MDA-MB-231 (Fig. 4b) et faible cytotoxicité cellules normales (Fig. 4c). AT-Fe/ART@ZIF inhibe activité MDA-MB-231 de 53,9 %, ART même concentration seulement 24,1 %. Coloration Calcein-AM confirme diminution cellules viables MDA-MB-231 avec concentration croissante AT-Fe/ART@ZIF (Fig. 4d).

AT-Fe/ART@ZIF potentialise génération ROS dans cellules MDA-MB-231

ART exerce activité anticancéreuse via génération ROS par clivage pont endopéroxyde fer-médité. Efficacité AT-Fe/ART@ZIF d'induire ROS examinée par sonde 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacétate (DCHF-DA). Fig. 5 : fluorescence légèrement plus forte cellules traitées ART et AT-Fe/ZIF vs témoins non traités, indiquant ART et Fe(II) induisent ROS. En contraste, forte fluorescence exposition AT-Fe/ART@ZIF preuve rendement ROS désiré, généré par clivage endopéroxyde ART médité Fe(II). Nanosystème préparé se dégrade dans cellules, accumule Fe(II), potentialise remarkably génération ROS. Effet anticancéreux ART et dérivés attribué à induction apoptose par processus variés : réponse dommage ADN, catabolisme lysosomial macroautophagie, stress oxydatif. Aussi rapporté : clivage fer-médité pont endopéroxyde ART affecte équilibre oxydatif intracellulaire vers ferroptose dans nombreux cancers. Cette induction ferroptose basée déséquilibre oxydatif amplifiée par ajout Fe(II). Fe(II) active ART et réagit avec peroxyde d'hydrogène intracellulaire générant radicaux hydroxyles par réaction Fenton, potentialisant effet inducteur apoptose ART dans cellules tumorales.

AT-Fe/ART@ZIF induit apoptose et ferroptose dans cellules MDA-MB-231

Pour étudier mort cellulaire et rôle Fe(II), nous utilisons chélateur fer désoxamine, inhibiteur apoptose Z-VAD-FMK, inhibiteur ferroptose ferrostatin-1 pour sauver cellules. Prédictivement, désoxamine (piégeur Fe(II)) bloque évidemment mort cellulaire, soulignant rôle crucial Fe(II). Taux survie MDA-MB-231 significativement amélioré par inhibiteurs apoptose et ferroptose de 31,4 % à 56,3 % et 76,0 % respectivement (Fig. 6a), confirmant importance apoptose et ferroptose dans mort cellulaire médiate AT-Fe/ART@ZIF. Test Annexin V-FITC par cytométrie flux pour quantification apoptose : AT-Fe/ART@ZIF induit apoptose dans 21,8 % cellules MDA-MB-231 (Fichier sup. 1: Fig. 6s), pourcentage > ART, apoptose impliquée mais non cause principale.

Caractéristique ferroptose : peroxydation lipidique endogène. MDA, produit peroxydation lipidique, dosé pour évaluer ferroptose. AT-Fe/ART@ZIF ~2,5× MDA vs témoin (Fig. 6b), dû présence nanovecteur enrichi Fe(II) et élévation radicaux lipidiques. GSH, majeur antioxydant cellulaire, diminue avec ferroptose. Rôle clé GSH dans ferroptose → évaluation GSH intracellulaire post-traitement AT-Fe/ART@ZIF. GSH diminué significativement vs cellules véhicule (Fig. 6c), preuve forte déplétion GSH et déséquilibre oxydation centré sur activation ART médité Fe(II) par AT-Fe/ART@ZIF. Western blot pour impact AT-Fe/ART@ZIF sur activité GPX4. AT-Fe/ART@ZIF inhibe significativement plus GPX4 que ART (Fig. 6d), concordant avec déplétion GSH maximale.

Expérience antitumorale in vivo

Évaluation efficacité antitumorale nanoparticules cellules MDA-MB-231 in vivo par inhibition tumeurs xénogreffes sous-cutanées souris nues porteuses tumeurs. Pendant traitement 14 jours, vs autres groupes, AT-Fe/ART@ZIF inhibe significativement croissance tumeurs xénogreffes MDA-MB-231 par abondante génération ROS via réaction Fe(II)-ART (Fig. 7a). Pas différence significative poids corporel tous groupes (Fig. 7b), manifestant effets secondaires négligeables AT-Fe/ART@ZIF. Étude effet thérapeutique : tumeurs et tissus normaux examinés coloration H&E après 14 j. Fig. 8 : AT-Fe/ART@ZIF cause plus grande région mort cellulaire tissu tumoral, sans dommage obvious ni apoptose tissus normaux. Résultats démontrent thérapie AT-Fe/ART@ZIF médiate efficacité anticancéreuse et faible toxicité systémique aigüe.

Conclusion

En résumé, la ferroptose offre remède potentiel CSTN, vantages exclusifs pour surmonter barrières thérapies actuelles. Nous avons conçu nanovecteur fournisseur fer pour ART basé sur AT-Fe(II) enrobé sur ZIF encapsulant ART par auto-assemblage piloté coordination pour ferroptose potentialisée. Nanovecteur se dissout microenvironnement faiblement acide libérant ART et Fe(II), causant haut niveau ROS et MDA intracellulaires, accompagné diminution GSH et GPX4, menant inhibition puissante croissance tumorale et efficacité anticancéreuse in vitro et in vivo. Ce travail fournit nouvelle approche potentialiser puissance nanomédecines ferroptotiques et nouvelles orientations thérapie CSTN. Biocompatibilité et mécanismes complets ferroptose induite AT-Fe/ART@ZIF à assurer pour investigations futures.

Disponibilité des données et matériaux

Toutes les données sont pleinement disponibles sans restriction.

Abréviations

MOF :

Cadres métalliques-organiques

CSTN :

Cancer du sein triple négatif

ART :

Artémisinine

AT :

Acide tannique

ZIF :

Cadre imidazolate zéolitique-8

AT-Fe/ART@ZIF :

Acide tannique et ion ferreux enrobés sur cadre imidazolate zéolitique-8 avec artémisinine encapsulée

ROS :

Espèces réactives de l'oxygène

LPO :

Lipides hydroperoxydes

GSH :

Glutathion

MET :

Microscopie électronique à transmission

FTIR :

Spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier

HPLC :

Chromatographie liquide haute performance

PBS :

Tampon phosphate salin

MTT :

3-(4,5-Diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium bromure

DFO :

Désoxamine

Fer-1 :

Ferrostatin-1

Z-VAD-FMK :

N-Benzylocarbonyl-Val-Ala-Asp(O-Me) fluorométhyl cétone

Calcein-AM :

Calcein-acétométhyle

DCFH-DA :

Dichloro-dihydro-fluorescein diacétate

MDA :

Malondialdéhyde

BSA :

Albumine sérique bovine

TBST :

Tampon Tris salin Tween

SDS-PAGE :

Électrophorèse sur gel polyacrylamide

GPX4 :

Glutathion peroxydase 4