La complexation avec le fullerène C60 augmente l'efficacité de la doxorubicine contre les cellules leucémiques in vitro

Introduction

Les principaux efforts de recherche sur le cancer visent à trouver des moyens plus puissants et plus sélectifs pour l'élimination directe des cellules cancéreuses. Cette tâche peut être accomplie avec des moyens de nanobiotechnologie. Les progrès récents dans ce domaine ont suscité un intérêt pour une nanostructure de carbone - C₆₀ fullerène [1] qui non seulement présente des propriétés physico-chimiques uniques [2, 3], une activité biologique [4,5,6,7,8,9,10] et un comportement antioxydant [11,12,13,14], mais possède également un potentiel important pour servir de nanosupport pour l'administration de médicaments dans les cellules cancéreuses [15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25] (ici systématiquement abrégé en « C_{60 ”).}

La doxorubicine, un médicament chimiothérapeutique anticancéreux à base d'anthracycline (ici abrégé systématiquement en « Dox ») est l'un des premiers candidats à une nano-administration plus ciblée en raison d'une cardiotoxicité potentiellement mortelle et d'autres effets secondaires graves [25, 26]. Le principal mécanisme de toxicité de Dox contre les cellules cancéreuses est son intercalation dans l'ADN nucléaire suivie de l'inhibition de l'activité de la topoisomérase, de la réplication de l'ADN et de sa réparation [26,27,28]. Mais les effets secondaires de Dox sur les cardiomyocytes sont considérés comme étant déterminés par un autre mécanisme, principalement la formation d'espèces réactives de l'oxygène liées au fer [27, 28]. La combinaison de C₆₀ le potentiel antioxydant [2, 11, 13] et sa capacité d'administration de médicaments [24, 25] rendent la nanostructure très attrayante pour la thérapie anticancéreuse.

La complexation de Dox avec des nanostructures augmente la taille du médicament, améliorant à la fois sa rétention dans l'organisme et prolongeant l'activité thérapeutique [29, 30]. Pour développer un nanosystème applicable pour une administration réussie de médicaments anticancéreux, les études précédentes se sont concentrées sur les aspects concernant la stabilité, la biocompatibilité, la biodistribution et la fonctionnalité [29,30,31,32,33].

Un couplage de Dox et C₆₀ pour un ciblage passif des cellules cancéreuses peut être réalisé par liaison covalente [15,16,17, 23] ou par des interactions non covalentes [18,19,20,21,22]. Un complexe de C₆₀ avec deux molécules Dox liées à un amide ont montré la même cytotoxicité contre les cellules MCF-7 du cancer du sein humain que le médicament libre [16]. Quand Dox était lié à C₆₀ grâce à un lieur carbamate, il n'a montré aucun changement dans l'efficacité antitumorale mais n'a eu aucune toxicité systémique dans un modèle de tumeur murine [17]. Lorsqu'une ou deux molécules de Dox étaient ancrées sur du C₆₀ pégylé particules par le biais d'une liaison de type uréthane, le complexe présentait même un effet antiprolifératif retardé sur les cellules MCF-7 [23].

Pour la complexation non covalente de la molécule Dox aromatique avec la surface polyaromatique de C₆₀ , l'effet d'empilement π-π est responsable. Dans une tentative pionnière, Evstigneev et al. [19] a montré une méthode simple et rapide de C₆₀ complexation non covalente avec Dox dans l'eau [19] et en solution physiologique [20]. Le nanosystème proposé s'est avéré avoir une toxicité plus élevée que le médicament libre contre diverses lignées cellulaires tumorales humaines in vitro et le carcinome pulmonaire de Lewis de souris in vivo [21, 22]. Dans une autre approche, un effet antimicrobien et l'applicabilité pour l'imagerie in vivo ont été montrés [18].

Le but de la recherche présentée est d'évaluer les propriétés physico-chimiques du C₆₀ -Complexe Dox formé après interaction non covalente des composants, son accumulation intracellulaire et son potentiel cytotoxique contre les lignées de cellules leucémiques humaines.

Méthodes/Expérimental

Produits chimiques

Un milieu liquide RPMI 1640, une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), du sérum bovin fœtal (FBS), de la pénicilline/streptomycine et de la L-glutamine ont été obtenus auprès de Biochrom (Berlin, Allemagne). Le bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium (MTT) et le Hoechst 33342 ont été obtenus auprès de Sigma-Aldrich Co. (St-Louis, USA). Du diméthylsulfoxyde (DMSO), du chlorure de sodium, de l'acétonitrile, de l'acide formique et du bleu trypan de Carl Roth GmbH + Co. KG (Karlsruhe, Allemagne) ont été utilisés.

C₆₀ et C₆₀ -Synthèse complexe Dox

Le C₆₀ immaculé une solution aqueuse de colloïde a été préparée par C₆₀ transfert du toluène à l'eau en utilisant une sonication continue par ultrasons comme décrit par Ritter et al. [34] Le C₆₀ obtenu La solution d'eau colloïdale avait une concentration finale de 150  μg/ml avec une pureté, une stabilité et une homogénéité de 99 % et une taille moyenne de nanoparticule de 100  nm [34, 35].

Dox ("Doxorubicin-TEVA", Pharmachemie B.V., Utrecht, Pays-Bas) a été dissous dans une solution physiologique à une concentration initiale de 150 μg/ml.

Un C₆₀ -Le complexe Dox a été préparé selon le protocole [20]. En bref, C₆₀ et les solutions Dox ont été mélangées dans un rapport pondéral 1:1 ou 2:1. Le mélange a été traité dans le disperseur à ultrasons pendant 30 min et agité magnétiquement pendant 24 h à température ambiante. La concentration finale des deux C₆₀ et Dox dans le C₆₀ -Le complexe Dox 1:1 était de 75  μg/ml. La concentration finale de C₆₀ et Dox dans le C₆₀ -Le complexe Dox 2:1 était de 100 g/ml et 50  μg/ml, respectivement. Le médicament non lié a été lavé avec le kit de dialyse Pur-A-LyzerTM Midi 1000 Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, USA). La stabilité (valeur de potentiel ζ) et la distribution granulométrique (diamètre hydrodynamique) [20, 36, 37, 38, 39] des complexes ont été systématiquement vérifiées et se sont révélées pratiquement inchangées après 6 mois de stockage en sérum physiologique. La concentration de travail de C₆₀ -Les complexes Dox dans les sondes ont été présentés selon une concentration équivalente en Dox dans la plage de 0,1 à 100  μM à dessein pour comparer l'effet des complexes avec l'effet du médicament libre dans la même concentration.

Chromatographie en phase liquide haute performance-Spectrométrie de masse en tandem

Spectrométrie de masse du C₆₀ -Les complexes Dox après séparation chromatographique ont été obtenus avec un spectromètre de masse quadripolaire en tandem LCMS-8040, équipé d'une source d'ionisation par électrospray (ESI) (Shimadzu, Kyoto, Japon) couplée à un système de chromatographie liquide haute performance (HPLC) Nexera. Ce dernier a utilisé une colonne Eclipse XDB-C18 100 mm × 4,6 mm, 3 μM (Agilent, Santa Clara, USA) avec une phase mobile isocratique d'acétonitrile et une solution d'eau d'acide formique à 0,1% (80:20, v /v ) à un débit de 0.3 ml/min. Les conditions chromatographiques en phase inverse et les paramètres MS/MS optimisés sont présentés dans le tableau 1. Pour l'identification et la quantification, l'ion moléculaire de Dox a été choisi. L'analyse HPLC-ESI-MS/MS a été réalisée en mode positif en utilisant un régime de surveillance de réactions multiples (MRM) qui fournit la meilleure sensibilité et précision des mesures. Après l'optimisation MS/MS, une transition MRM unique qui inclut des ions précurseurs et produits caractéristiques a été acquise et utilisée pour une identification et une quantification plus poussées. Le Dox protoné ([M ⁺ H] ⁺ , 544,2 m/z) a été utilisé comme ion précurseur avec les ions fragments les plus abondants de 130,2 et 361,1  m/z.

Résultats et discussion

Analyse HPLC-MS/MS de C₆₀ -Complexes Dox

Pour la séparation chromatographique, nous avons utilisé les conditions de phase inverse en espérant que pendant le processus de séparation, le C₆₀ hydrophobe les molécules sont retenues sur la colonne beaucoup plus fortement que celles du Dox plus polaire [41]. L'élution avec la phase mobile polaire devrait évidemment provoquer la décomposition du complexe et la libération de Dox libre qui possède une affinité plus élevée pour la phase mobile et peut être détecté par spectrométrie de masse.

Pour confirmer la présence du complexe en solution, une concentration de 1 M de Dox a été choisie comme optimale pour l'analyse analytique. Dans des conditions d'écoulement isocratique, le temps de rétention du Dox libre et du Dox en tant que composant des complexes avec C₆₀ était différent - 11,66 et 9,44 min, respectivement (Fig. 1). De plus, les pics de chromatographie de Dox libérés par les complexes étaient plus larges et avec une « traînée de pics » observée. Le décalage détecté dans les temps de rétention ainsi que les différentes formes de sélection indiquent que la décomposition de C₆₀ -Dox conjugués sur les molécules de fullerène de la colonne qui possèdent une affinité plus élevée pour la colonne C18. Par conséquent, la nanostructure occupe une partie des sites de liaison actifs et interfère correctement avec la liaison de Dox à ces sites, affectant ainsi le processus de séparation. Cela se traduit par une rétention plus courte (temps réduit nécessaire pour que Dox traverse la colonne) ainsi qu'une bordure et une queue de pic pour le Dox libéré du complexe par rapport au médicament libre. Un phénomène très similaire a été observé par Lie et al. [42] lors de la séparation chromatographique de C₆₀ complexes non covalents avec le pullulane. Les différences dans les chromatogrammes du Dox libre et ceux libérés des complexes ont évidemment mis en évidence la présence de C₆₀ -Complexes Dox en solution.

Chromatogrammes de surveillance de réactions multiples de Dox libre (1 μM), C₆₀ -Dox 1:1 et C₆₀ -Complexes Dox 2:1 (concentration équivalente Dox 1 μM) sous flux isocratique (acétonitrile, acide formique 0,1% dans H₂ O, 80:20, v :v ), précurseur → transition des ions produits : 544.2 → 130.2 et 361.1 m/z ; a.u. unités arbitraires

Analyse spectroscopique et fluorométrique

Les propriétés optiques de Dox sont déterminées par la transition électronique dans le système -complexé de ses cycles aromatiques et de ses groupes cétoniques [43]. Le spectre d'absorption typique de Dox se situe dans les longueurs d'onde de λ < 600 nm avec une large bande à 480 nm (Fig. 2a). Le spectre d'absorption UV/Vis du C₆₀ vierge La solution colloïdale d'eau a trois bandes d'absorption typiques avec des maxima à 220, 265 et 350  nm et une longue queue large et mineure jusqu'à la région rouge de la lumière visible [34, 44]. Par conséquent, les spectres de contrôle respectifs de C₆₀ libre ont été soustraits des spectres du complexe. Les spectres d'absorption observés des deux complexes 50 μM étaient similaires à ceux du Dox 50  μM libre, mais un effet hypochrome de 30 % a été observé (Fig. 2a) indiquant une fixation Dox sur le C₆₀ surface due aux interactions d'empilement π-π.

Caractérisation optique des complexes. Spectres de densité optique de Dox libre et C₆₀ -Complexes Dox (a ). Spectres d'émission de fluorescence de Dox libre et C₆₀ -Complexes Dox à concentration équivalente Dox de 3 à 50 μM (b ); a.u. unités arbitraires

Le maximum d'absorption de longue longueur d'onde de Dox (λ = 480 nm) a été utilisé comme longueur d'onde d'excitation pour suivre sa fluorescence. Le spectre de fluorescence présente une large bande composée de trois pics à 560, 594 et 638 nm avec un maximum autour de 594 nm (Fig. 2b) [43], alors que C₆₀ n'a pas de fluorescence détectable dans cette bande spectrale. C₆₀ -La fluorescence des complexes Dox a été estimée dans une série de dilutions avec une concentration équivalente en Dox de 3 à 50  μM. Quelle que soit la dilution, la fluorescence de Dox (λ_ex = 480 nm, λ_em = 594 nm) dans les complexes a été trempé par C₆₀ fractions (Fig. 2b). Ainsi, la fluorescence de Dox dans les deux complexes à une concentration équivalente de Dox de 3 M a semblé être éteinte de 50 %. L'extinction de fluorescence Dox observée est attribuée à la forte capacité d'acceptation d'électrons de C₆₀ [3] et le transfert d'énergie intramoléculaire à l'état excité typique des complexes Dox non covalents [18, 36, 45], indiquant la proximité spatiale des composants.

Analyse de la distribution de la taille par diffusion dynamique de la lumière

La taille et la stabilité d'un médicament anticancéreux nanoparticulaire dépendent essentiellement de la composition du milieu de culture cellulaire, de la force ionique et de la concentration en protéines. Le diamètre hydrodynamique moyen de 1 μM C₆₀ -Les complexes Dox 1:1 et 2:1 dans une solution saline physiologique (0,9% de NaCl) étaient respectivement de 135 ± 5 nm et 134 ± 6 nm, ce qui correspond aux données d'enquêtes précédentes [20]. Pour estimer la stabilité dans le milieu de culture cellulaire, 1-μM C₆₀ -Les complexes Dox ont été incubés à 37°C pendant 72h dans du RPMI supplémenté avec 10 % de FBS. Le modèle de distribution de la taille des particules dans ce milieu (Fig. 3) est attribué à la teneur élevée en protéines ainsi qu'à son agrégation probable [46, 47].

Taille hydrodynamique (diamètre, nm) de 1 μM С₆₀ -Complexes Dox en milieu de culture cellulaire RPMI additionné de 10% de FBS à 0 (a ) et 72h (b ) incubation. Intensité (%) pourcentage de toute l'intensité lumineuse diffusée

Les données de diffusion dynamique de la lumière sur 1 μM C₆₀ -La distribution de diamètre hydrodynamique des nanocomplexes Dox 1:1 et 2:1 dans une culture cellulaire complétée par du FBS a montré que leur taille était de 138 ± 6 nm et 139 ± 5 nm lorsqu'elle était mesurée immédiatement (Fig. 3a) et 146 ± 4 nm et 144 ± 5 nm après 72 h d'incubation (Fig. 3b), respectivement.

La stabilité détectée du maximum (environ 140 nm) a indiqué qu'il n'y avait pas d'agrégation supplémentaire du C₆₀ -Complexes Dox au cours d'une incubation prolongée dans un milieu de culture cellulaire supplémenté en FBS qui a confirmé leur adéquation pour les études in vitro.

Viabilité de la cellule

La viabilité des cellules leucémiques humaines de différentes lignées a été estimée par test MTT à 24, 48 et 72 h d'incubation en présence de C₆₀ -Complexes Dox ainsi que de Dox libre séparément à des concentrations équivalentes. C₆₀ seul à des concentrations équivalentes à celles des complexes n'a eu aucun effet sur la viabilité des cellules leucémiques (données non présentées).

La figure 4 présente une diminution de la viabilité des cellules leucémiques en fonction du temps et de la concentration sous traitement Dox. Il a été démontré que le médicament présentait une toxicité contre les cellules leucémiques dans la gamme nanomolaire. La sensibilité des cellules leucémiques au Dox s'est avérée suivre l'ordre Molt-16 ˃ THP1 ˃ Jurkat ˃ CCRF-CEM (moins sensible).

Viabilité des cellules leucémiques CCRF-CEM, Jurkat, THP1 et Molt16, traitées avec des doses égales de Dox libre ou C₆₀ -Complexes Dox pour 24, 48 et 72 h (*p ≤ 0,05 par rapport au Dox gratuit, ***i>p ≤ 0,05 par rapport au C₆₀ -Complexe Dox 1:1, n = 5)

Sous l'action de 100 nM de Dox, la viabilité des cellules CCRF-CEM a été diminuée à 84 ± 7, 50 ± 4 et 34 ± 7% par rapport au contrôle à 24, 48 et 72 h, respectivement. Le modèle comparable d'effet toxique Dox 100  nM a été trouvé dans les cellules Jurkat. La viabilité des cellules THP1 après traitement avec des cellules Dox 100 nM s'est avérée être de 50 ± 4, 47 ± 5 et 13 ± 4% à 24, 48 et 72 h, respectivement. Les concentrations de Dox inhibitrices semi-maximales (IC50) pour les cellules CCRF-CEM, THP1 et Jurkat à 72 h d'incubation ont été estimées à 80 ± 9, 43 ± 5 et 38 ± 6 nM, respectivement. Ces données correspondent aux données de la littérature [48, 49]. Les cellules Molt-16 semblaient être les plus sensibles au médicament puisque son effet toxique a été détecté dans la plage de 1 à 25 nM au cours de toutes les périodes d'incubation cellulaire. La viabilité des cellules Molt-16 traitées avec 5 nM Dox a été diminuée à 75 ± 4, 28 ± 4 et 18 ± 4% de celle du contrôle à 24, 48 et 72 h, respectivement, et la valeur de IC50 à 72 h était égal à seulement 2,0 nM. La sensibilité élevée similaire des cellules Molt-16 avec une induction de l'apoptose 10 fois plus intense par rapport aux cellules Jurkat sous traitement d'un alcaloïde à base de plantes a été précédemment rapportée par Cai et al. [50].

Des cellules traitées avec du Dox libre ont été utilisées comme contrôle pour évaluer la viabilité sous action de C₆₀ -Complexes Dox aux doses équivalentes du médicament. La valeur de IC50 pour le Dox gratuit et C₆₀ -Les complexes Dox ont été calculés pour chaque point dans le temps et chaque lignée cellulaire et sont répertoriés dans la figure 4.

Il a été montré que les deux C₆₀ -Les complexes Dox possédaient un potentiel toxique plus élevé que le Dox libre contre les lignées cellulaires leucémiques humaines (Fig. 4).

En résumé, nos nombreuses expériences ont montré pour les quatre lignées cellulaires une variété de toxicités accrues jusqu'à 3,5 fois. C₆₀ -Le complexe Dox 1:1 a montré une toxicité plus élevée par rapport au complexe 2:1. L'effet moins prononcé (diminution de la CI50 sur ≥  2,5 fois par rapport à celle du Dox libre) du complexe 2:1 peut être attribué à la concentration plus élevée de C₆₀ comme son composant. En raison de son activité antioxydante [11, 13], excès de C₆₀ peut protéger les cellules contre le stress oxydatif associé à Dox [27].

Accumulation intracellulaire de Free Dox et C₆₀ -Complexes Dox

Pour étudier une corrélation potentielle de l'effet toxique accru de C₆₀ -Complexes Dox avec une accumulation intracellulaire plus efficace de médicaments, l'absorption cellulaire de Dox libre et C₆₀ -Dox a été étudié. Étant donné que Dox possède une forte absorption et une forte fluorescence dans la région spectrale visible [43, 45] (Fig. 2), le suivi des complexes Dox est possible avec des techniques de fluorescence directe non invasives. Les cellules CCRF-CEM ont été incubées en présence de 1 μM Dox ou C₆₀ -Complexes Dox à une concentration équivalente au médicament, examinés par microscopie à fluorescence et soumis à une cytométrie en flux pour quantifier le niveau intracellulaire de médicament accumulé après un traitement de 1, 3 et 6 h (Fig. 5). L'intensité de fluorescence moyenne de chaque échantillon a été calculée à partir d'histogrammes logarithmiques FACS par la valeur du signal fluorescent rouge Dox respectif (λ_ex = 488 nm, λ_em = 585/29 nm) et présenté dans le tableau 2. L'autofluorescence des cellules non traitées a été utilisée comme contrôle négatif (Fig. 5a).

Accumulation intracellulaire du 1 μM libre et du C₆₀ Dox complexé. Cytométrie en flux (a ) et des images de microscopie à fluorescence (b ) de cellules CCRF-CEM incubées avec Dox et C₆₀ -Dox au ratio 1:1 et 2:1 pour 1, 3 et 6 h. Barre d'échelle 20 μM

L'accumulation en fonction du temps de 1 M de Dox a été estimée par l'amélioration de l'intensité de fluorescence (Fig. 5, Tableau 2). Les images de microscopie à fluorescence illustrent que C₆₀ -Les complexes Dox ont été internalisés plus rapidement que le médicament libre, comme en témoigne une fluorescence intracellulaire beaucoup plus lumineuse (Fig. 5b). Les intensités de fluorescence moyennes des cellules CCRF-CEM, traitées au 1:1 C₆₀ -Le complexe Dox à une concentration équivalente de Dox de 1 M a augmenté de 1,5, 1,7 et 2,2 fois par rapport à la Dox libre à 1, 3 et 6  h, respectivement. 2:1 C₆₀ -Le complexe Dox présentait une accumulation intracellulaire retardée du médicament atteignant le même niveau que le complexe 1:1 à 6 h (Fig. 5, Tableau 2).

Les données obtenues ont démontré que la complexation Dox avec C₆₀ favorise l'entrée dans les cellules mais n'affecte pas sa localisation. La coloration témoin des cellules étudiées avec le colorant de liaison à l'ADN Hoechst 33342 a révélé sa colocalisation avec le signal Dox (données non présentées). Évidemment, les molécules Dox de C₆₀ complexes et le médicament libre est entré dans les noyaux qui reflètent son impact antiprolifératif par des dommages à l'ADN [26,27,28]. Augmentation de l'absorption intracellulaire d'un médicament lors de la complexation avec le C₆₀ indique que ce dernier fonctionne comme un promoteur de transport de drogue. C₆₀ Il a été démontré que la nanostructure transmigre dans la membrane plasmique cellulaire en raison de la diffusion passive [51] et/ou de l'endocytose/pinocytose [52, 53], alors que des petites molécules telles que Dox ne peuvent pénétrer que par diffusion passive. Le C₆₀ La structure ressemble à la structure de la clathrine [54, 55], le principal composant de l'enveloppe de la formation des vésicules au cours de l'endocytose. Par conséquent, C₆₀ peut fonctionner comme un transporteur de petites molécules aromatiques [56]. Au contraire, une liaison covalente entre le transporteur et la cargaison introduit une altération structurelle dans la molécule de médicament. Par conséquent, le schéma d'accumulation et l'interaction avec les cibles intracellulaires sont modifiés, entraînant une perte complète ou partielle de la fonction du médicament. Liu et al. [15] a montré que C₆₀ avec deux molécules Dox liées par une liaison amide était distribué principalement dans le cytoplasme.

Conclusion

Les propriétés physico-chimiques du C₆₀ -Des complexes Dox avec un rapport 1:1 et 2:1 des composants ont été déterminés et leur toxicité contre les cellules leucémiques humaines CCRF-CEM, Jurkat, Molt-16 et THP1 a été estimée.

L'analyse HPLC-MS/MS a révélé des distinctions évidentes dans les chromatogrammes de Dox libre et ceux libérés à partir de C₆₀ -Complexes Dox. Complexation de C₆₀ avec Dox a été confirmé par l'effet hypochrome d'absorption et l'extinction de la fluorescence en C₆₀ -Complexes Dox. Nous avons déterminé que la taille de C₆₀ -Les complexes Dox autour de 140 nm ont été retenus en présence de protéine et une incubation prolongée dans le milieu. Des études sur des lignées cellulaires leucémiques humaines ont révélé que C₆₀ -Les complexes Dox possédaient une cytotoxicité plus élevée par rapport au médicament libre à des concentrations équivalentes. À 72 h d'incubation des cellules, la valeur de la CI50 pour les complexes 1:1 et 2:1 a diminué de ≤ 3,5 et ≤ 2,5 fois, respectivement, par rapport à la CI50 pour le médicament libre. Complexation avec C₆₀ favorisé l'entrée de Dox dans les cellules leucémiques. Un traitement des cellules CCRF-CEM pendant 6 h avec C₆₀ -Les complexes Dox à une concentration équivalente à 1 M de Dox ont été suivis d'une augmentation de 2,2 fois du niveau intracellulaire du médicament par rapport au traitement avec du Dox libre.

Nos résultats confirment la fonction de C₆₀ en tant que nanosupport et la perspective de son application pour l'optimisation de l'efficacité de Dox contre les cellules leucémiques. Comme Dox n'est qu'une substance représentative ou modèle pour de nombreux médicaments antitumoraux, nous nous attendons à ce que nos résultats puissent être transférés à d'autres médicaments. L'augmentation de l'absorption d'un médicament dans les cellules tumorales et/ou ses qualités antitumorales peut indiquer de nouvelles stratégies de traitement. La complexation des médicaments avec des nanosupports peut servir à réduire leurs débits de dose efficaces et ainsi atténuer les effets secondaires indésirables.

Historique des modifications

Abréviations

C₆₀ :

C₆₀ fullerène

DMSO :

Diméthylsulfoxyde

Dox :

Doxorubicine

ESI :

Ionisation électrospray

FBS :

Sérum fœtal bovin

HPLC-MS/MS :

Chromatographie liquide haute performance-spectrométrie de masse en tandem

IC50 :

Concentration inhibitrice demi-maximale

LOD :

Limite de détection

LQ :

Limite de quantification

MRM :

Surveillance de réactions multiples

MTT :

3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide

PBS :

Solution saline tamponnée au phosphate