Impact des nanoparticules de silice sur l'expression génique et la méthylation de l'ADN dans les tissus pulmonaire et testiculaire

Résumé

La nanotechnologie s'est développée rapidement et est maintenant utilisée dans de nombreuses thérapies médicales de pointe. Cependant, il existe une préoccupation croissante que l'exposition aux nanoparticules (NP) puisse induire différentes maladies systémiques car les mécanismes épigénétiques sont associés à de plus en plus de maladies. Le rôle de la modification épigénomique par les NP est important pour l'étiologie des maladies. Notre étude visait à déterminer les mécanismes épigénétiques des dommages dans les cellules pulmonaires et testiculaires en exposant les cellules à des NP de SiO₂. Nous avons utilisé des souris mâles C57BL/6 pour caractériser l'effet dommageable des NP de SiO₂ sur les cellules pulmonaires et testiculaires ainsi que l'état de méthylation résultant au niveau de la région du domaine imprimé Dlk1/Dio3. Les cellules A549 exposées aux NP de SiO₂ ont présenté une apoptose cellulaire, et les souris mâles exposées aux NP de SiO₂ ont eu des tissus pulmonaires et testiculaires altérés. Les gènes dans les domaines imprimés de la région Dlk1/Dio3 ont changé dans les deux tissus ; Dlk1, Rtl1 et Dio3 sont surexprimés dans le testicule tandis que Dlk1 et Dio3 sont aussi surexprimés dans les tissus pulmonaires. Le séquençage bisulfite PCR de poumon et testicule de mâles adultes étaient majoritairement hypométhylés, avec quelques CpGs hyperméthylés. Ces résultats indiquent que les nanoparticules jouent un rôle important dans la méthylation de l'ADN des gènes imprimés.

Contexte

Le dioxyde de silicium est un oxyde de silicium de formule chimique SiO₂, le plus communément trouvé dans la nature sous forme de quartz et dans divers environnements organiques [1]. Les nanoparticules conçues ont été largement répandues dans la croissance rapide et l'application de la nanotechnologie dans les industries de haute technologie. Cette nanoparticule particulière est largement utilisée dans une gamme de produits de consommation incluant l'électronique, les produits plastiques, médicaux, cosmétiques et matériaux de revêtement en raison de leurs propriétés physico-scientifiques telles que grande surface spécifique, sites réactifs abondants, haute énergie de surface, liaisons chimiques insaturées, forte capacité d'adsorption et forte tendance à interagir avec les métaux et la matière organique, modifiant ainsi les contaminants et leur transport dans l'environnement [2]. La présence de nanoparticules (NP) de SiO₂ dans une large gamme de produits de consommation augmente leur probabilité d'être libérées dans l'environnement et d'entrer en contact avec la population humaine.

Des études expérimentales précédentes ont montré qu'une instillation intratrachéale à dose unique ou des injections intrapéritonéales multiples d'une espèce de nanoparticules métalliques et d'oxydes métalliques causent des effets toxiques des niveaux cellulaires aux niveaux systémiques et organiques [3]. Le traitement par NP de SiO₂ réprime la croissance de lignées de cellules de cancer du sein en augmentant l'apoptose et en réduisant la motilité cellulaire. De plus, l'exposition aux NP de SiO₂ perturbe significativement le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) [4]. Lorsque des modèles de rats ont été traités avec trois tailles différentes de NP de TiO₂ et comparés aux témoins, le fluide de lavage bronchoalvéolaire (BALF) traité avec de gros agglomérats (> 100 nm) d'aérosols a induit une réponse inflammatoire aiguë, tandis que de petits agglomérats (< 100 nm) d'aérosols ont produit un dommage oxydatif significatif et une cytotoxicité [5].

L'étude de la toxicité des nanoparticules sur la reproduction est un domaine en croissance. Une étude a démontré que sous la même dose de traitement, les NP de Ni induisaient une toxicité reproductive plus élevée chez C. elegans que les MP de Ni (microparticules). Ces toxicités reproductives observées chez C. elegans incluaient une taille de couvée réduite, œuf fécondé et activation des spermatides [6]. Il existe des preuves croissantes que certains effets environnementaux peuvent être transmis à la descendance via des voies paternelles sans changements dans le génome du sperme [7, 8]. L'information paternelle existe non seulement dans le génome, mais aussi dans les marqueurs épigénétiques spécifiques associés, le contenu en ARNm et les ARN non-codants.

Le stress oxydatif est un mécanisme important dans la toxicité des nanoparticules, qui peut déclencher des dommages à l'ADN, inflammation, dénaturation des protéines et peroxydation lipidique [9]. Ces effets biologiques sont influencés par les propriétés physicochimiques des nanoparticules, incluant leur taille, surface, forme, chimie de surface, fonctionnalisation et solubilité [10, 11]. Il existe des preuves croissantes qui démontrent clairement que l'exposition aux nanoparticules peut déclencher des altérations épigénétiques dans les tissus et cellules même à de faibles doses non cytotoxiques [12, 13]. L'épigénétique est l'étude des changements héréditaires dans la fonction des gènes qui n'impliquent pas de changements dans la séquence d'ADN incluant la méthylation de l'ADN, l'empreinte génique, les modifications d'histones et la régulation par les ARN non-codants [14]. De telles altérations épigénétiques sont associées au développement et à la progression de nombreux états pathologiques et maladies [15]. Par conséquent, les effets épigénétiques sont une partie cruciale du dépistage d'évaluation des risques des patients au niveau cellulaire.

Le domaine imprimé Dlk1/Dio3 contient trois régions différemment méthylées (DMR) connues qui sont méthylées paternellement : DMR intergénique (IG-DMR), DMR 3 exprimé maternellement (Gtl2-DMR), et DMR Dlk1 [16]. Des études précédentes suggèrent que l'IG-DMR dicte le statut de méthylation allélique du promoteur DMR Gtl2, qui contrôle alors l'expression génique à travers tout le cluster [17]. Le génome de souris a un grand nombre de gènes imprimés au domaine Dlk1/Dio3 dans la région distale du chromosome 12. L'IG-DMR situé entre les gènes imprimés Dlk1 et Gtl2 est spécifiquement méthylé dans la lignée germinale mâle et régule l'expression allélique spécifique des gènes imprimés [18]. Le statut de méthylation de l'IG-DMR est établi avant la naissance et est ainsi maintenu tout au long de la vie d'un mâle dans la lignée germinale mâle pendant la différenciation des cellules germinales mâles, signifiant que la méthylation IG-DMR est maintenue dans les spermatogonies et spermatocytes des testicules matures.

Notre but était de trouver les changements dans l'expression des gènes de la lignée germinale mâle pendant la spermatogenèse avant le silence transcriptionnel et translationnel afin d'expliquer l'influence paternelle sur la descendance à travers les changements environnementaux. Les facteurs environnementaux peuvent modifier les modifications transcriptionnelles du sperme, ce qui peut mener à des altérations dans le développement de la progéniture. Pour mener cette investigation dans notre travail, nous avons utilisé des lignées cellulaires et des souris comme modèles pour le dépistage des effets toxiques des NP de SiO₂. À notre connaissance, c'est la première étude démontrant les mécanismes épigénétiques des régions imprimées Dlk1/Dio3 que les nanoparticules causent des dommages dans les tissus pulmonaire et testiculaire.

Méthodes

Animaux expérimentaux

La manipulation des animaux a été effectuée conformément au Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire sous le protocole d'utilisation animale correspondant à l'Université Médicale de Nanjing. Les souris ont été obtenues de Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. Tous les animaux étaient logés à 23 °C avec un cycle de lumière de 12 h. De l'eau stérilisée et de la nourriture pour rongeurs étaient consommées par les souris à volonté. L'activité et le comportement des souris étaient surveillés quotidiennement. Après 2 semaines, les souris ont été injectées de SiO₂ nano-dimensionné 12,5 mg/kg.

Produits chimiques

SiO₂ nano-dimensionné (base métal trace 99,5%, taille particulaire 10–20 nm) a été obtenu de Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Les nanoparticules ont été suspendues dans le milieu RPMI 1640 pour créer une solution stock, dispersées par vibration ultrasonique pendant 20 min, diluées aux concentrations appropriées, et dispersées pendant 20 min supplémentaires.

Caractéristiques des NP de SiO₂

La taille et le potentiel zêta ont été enregistrés en utilisant un Malvern Zetasizer Nano ZSP.

Extraction d'ARN et qRT-PCR

Les échantillons de poumon et testicule ont été congelés rapidement dans l'azote liquide puis stockés à -80 °C après environ 4 h. Nous avons décongelé les échantillons avant d'extraire les échantillons.

L'ARN total a été isolé des échantillons en utilisant 1 mL de réactif TRIzol (Invitrogen Life Technologies Co, USA). Le mélange a été ultrasoniqué à 80% de puissance pendant 5 min, ajouté 0,2 mL de chloroforme, et ensuite centrifugé à 12 000g/min à 4 °C pendant 15 min. Ensuite, trois étapes de purification phénol/chloroforme ont été ajoutées afin d'éliminer les protéines. Ensuite, nous avons utilisé l'absorbance UV pour mesurer le contenu et la qualité d'ARN de chaque échantillon à 260 et 280 nm. Les séquences d'amorces des ARNm sont montrées dans le fichier additionnel 1 : Table S1 et S2. La qRT-PCR a été réalisée selon les instructions du fabricant, comme décrit précédemment [19]. La PCR en temps réel a été réalisée en utilisant SYBR Green (Vazyme). Le cycle PCR était le suivant : dénaturation initiale à 95 °C pendant 30 s, suivie de 40 cycles de dénaturation à 95 °C pendant 15 s, hybridation à 60 °C pendant 15 s, et extension à 72 °C pendant 30 s. La quantité de gènes cibles a été analysée en utilisant la méthode 2^-ΔCt suivant normalisation avec β-actine.

Extraction d'ADN, traitement bisulfite et PCR de séquençage bisulfite

L'ADN a été isolé des tissus testiculaires et pulmonaires en utilisant un kit ADN (QIAamp DNA Mini Kit; Qiagen. No.51304; USA) suivant les recommandations du fabricant. La conversion bisulfite de 500 ng d'ADN génomique total a été réalisée en utilisant un kit (EpiTect® Bisulfite kit; Qiagen. No. 59104; USA) suivant les recommandations du fabricant. Différents oligonucléotides de méthylation CpG ont été conçus en utilisant le logiciel Methyl Primer Express v1.0 et les séquences sont P1-F 5′-TTGGGTTTTGAGGAGT AGTA-3′, P1-R 5′-ACATCCTATTCCCTAATAAAAATT-3′ ; P2-F 5′-TATTGGTTTGGTATATATGGATGTA-3′, P2-R 5′-ATAAAACACTTAACTCRTACCRTA-3′ ; P3-F 5′- TTTGTGTAGTTGTGTTATGGTATATTT-3′, P3-R 5′- ACCCATAACAAACCACAACA-3′ ; P4-F 5′-TTGTGGTTTGTTATGGGTAAGTT-3′, P4-R 5′-TCAAAACATTCTCCATTAACAAAA-3′.

Chaque échantillon d'ADN a été amplifié par PCR comme suit : 2,5 µl 10 × tampon PCR mélange réaction PCR avec 500 ng d'ADN traité au bisulfite, 0,5 µl chacun d'amorces forward et reverse, 0,5 µl mélange dNTP, 0,5 µl rTaq (500 U, dNTP, Mg²⁺) (Takara Bio, Tokyo, Japon), addition d'eau ddH₂O jusqu'à un volume de 25 µl. Après activation de la polymérase à 94 °C pendant 10 min, il a été suivi par 40 cycles de la séquence suivante : 30 s à 94 °C, 30 s à 58 °C, 1 min à 72 °C, et extension finale à 72 °C pendant 10 min.

Culture cellulaire et traitement

Les cellules A549 ont été achetées de ATCC (Manassas, VA, USA) et cultivées en 1640 supplémenté avec 10% sérum fœtal bovin (FBS) à 37 °C et 5% CO₂ dans un incubateur humidifié. Les cellules ont été placées sur des plaques à 96 puits, incubées avec différentes concentrations de NP de SiO₂ : 62,5, 125, 250, 500, 1000 et 2000 µg/ml pendant 24 h.

Essai de viabilité cellulaire

La viabilité cellulaire a été évaluée par l'essai de prolifération CCK8. Les cellules ont été placées à une densité de 1,5 × 10⁴ par puits dans une plaque à 96 puits et incubées pendant la nuit. Après exposition aux NP de SiO₂ à différentes concentrations, 100 µl de CCK8 ont été ajoutés à chaque puits, et les cellules ont été incubées pendant 30 min à 37 °C pour permettre le métabolisme du CCK8. Enfin, l'absorbance a été déterminée à 450 nm. Les taux d'inhibition cellulaire ont été calculés et transformés en IC₅₀ en utilisant SPSS 15.0.

Analyse statistique

Tous les calculs ont été effectués en utilisant le logiciel SPSS 15.0. Les comparaisons entre groupes ont été faites en utilisant des tests t non apparentés et un test du chi-carré de Pearson pour BSP. Les données sont présentées comme moyenne ± EC. Dans tous les cas, une valeur de p < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

Résultats

Caractérisation des NP de SiO₂

Nous avons caractérisé les NP de SiO₂ sous conditions expérimentales. Le rayon hydrodynamique moyen et le potentiel zêta des NP de SiO₂ en milieu de culture étaient 371,77 ± 18,46 nm et 18,83 ± 2,12 mV respectivement (Fig. 1).

Caractérisation des NP de SiO₂ en suspension. Particules suspendues en milieu de culture cellulaire avec 10% FBS. a, b Taille et potentiel zêta des NP de SiO₂ évalués par Zetasizer Nano ZSP. c Viabilité cellulaire déterminée par essai CCK8 après exposition à diverses concentrations de NP de SiO₂ pendant 24 h. Moyennes ± EC d'expériences en double, chacune consistant en trois répliques techniques. *** p < 0,001

Effet des NP de SiO₂ sur la lignée cellulaire A549

Pour déterminer la toxicité des NP de SiO₂, nous avons effectué un test de prolifération avec des cellules A549, pour déterminer l'IC₅₀ des NP de SiO₂ sur les cellules A549. Comme illustré Fig. 1c, les NP de SiO₂ diminuent la viabilité des cellules A549 de manière dépendante de la concentration. La réduction de la viabilité cellulaire est significative à une concentration de NP de SiO₂ supérieure à 62,5 µg/ml (p < 0,001). L'IC₅₀ 24 h d'un produit chimique est défini comme une concentration qui affecte 50% des cellules après 24 h d'exposition. L'IC₅₀ 24 h déterminé pour les NP de SiO₂ était 4942 µg/ml.

Effets des NP de SiO₂ sur le poumon et le testicule murins

Nous avons déterminé si l'exposition aux NP de SiO₂ à une dose de 12,5 mg/kg de poids corporel mènerait à des dommages de la membrane pulmonaire et même des dommages testiculaires dans notre modèle murin. Comme montré dans les figures, l'exposition aux NP de SiO₂ a conduit à un corps lamellaire perturbé dans les sections histologiques du poumon (Fig. 2a, b) et un dommage des crêtes mitochondriales en comparaison au groupe témoin dans le testicule (Fig. 2c, d). Nous avons ensuite investigué les effets pulmonaires et testiculaires des NP de SiO₂ sur l'activation de l'empreinte sur la région imprimée Dlk1/Dio3.

Images MET de tissus pulmonaires et testiculaires de rats exposés aux NP de SiO₂. a Morphologie évaluée dans les tissus pulmonaires par MEB dans les témoins. b Morphologie évaluée dans les tissus pulmonaires par MEB dans le groupe traité. c Morphologie évaluée dans les tissus testiculaires par MEB dans les témoins. d Morphologie évaluée dans les tissus testiculaires par MEB dans le groupe traité. Barres d'échelle représentent 2,0 µm

Expression des gènes imprimés sur le poumon et le testicule murins

Afin d'illustrer les changements dans le poumon et le testicule, nous avons détecté les gènes imprimés dans ces tissus. Nous avons choisi les 24 gènes imprimés ; ils étaient Dio3, Ddc, Dlk1, Gpr1, Gtl2, H19, Igf2, Igf2as, Igf2r, Inpp5f, Magel2, Magi2, Mest, Mir296, Mir298, Ndn, Nnat, Peg10, Plagl1, Pwcr1, Rasgrf1, Rtl1, Snrpn et Snurf. Treize de ces gènes sont exprimés dans le poumon et le testicule : Dio3, Dlk1, Gpr1, Gtl2, Igf2r, Igf2, Inpp5f, Peg10, Ndn, Nnat, Rasgrf1, Rtl1 et Snrpn (Fig. 3a, b). Les gènes exprimés différemment d'intérêt principal étaient sur la région imprimée Dlk1/Dio3, qui contient Dlk1, Gtl2, Rtl1 et Dio3.

Expression des gènes imprimés dans le poumon et le testicule. a L'expression des gènes imprimés dans le poumon. b L'expression des gènes imprimés dans le testicule. *P < 0,05. **P < 0,01. Test t de Student

Expression de la région imprimée Dlk1/Dio3

La région imprimée Dlk1/Dio3 contient trois gènes codant pour des protéines (Dlk1, Gtl2, Rtl1 et Dio3) sur l'allèle hérité [20] (Fig. 4c). Pour élucider le rôle de la région Dlk1/Dio3 dans la réponse des tissus pulmonaire et testiculaire au traitement par NP de SiO₂, nous avons analysé le patron de méthylation de DMR comparé aux témoins. Différents gènes sont ciblés par la méthylation dans le poumon et le testicule. L'expression de Dlk1 et Dio3 étaient surexprimées dans les poumons et le testicule, tandis que Rtl1 était surexprimée seulement dans le testicule (Fig. 4a, b).

L'expression de la région imprimée Dlk1/Dio3. a Les gènes de la région Dlk1/Dio3 exprimés dans le poumon. b Les gènes de la région Dlk1/Dio3 exprimés dans le testicule. c Schéma de la région Dlk1/Dio3. *P < 0,05. **P < 0,01. Test t de Student

La méthylation des régions DMR Dlk1/Dio3

Pour investiguer davantage si l'expression des gènes change en réponse à la méthylation de l'ADN, nous avons abordé le statut de méthylation de cette région dans le poumon et le testicule de souris. Dans l'analyse de méthylation de l'ADN, nous avons déterminé les séquences des trois sections des îles CpG. Dans le testicule, elles sont hypométhylées ; cependant, dans l'île CpG 1, elles sont significativement hyperméthylées (Fig. 5). Dans le poumon, la méthylation globale est la même que dans le testicule, tandis que l'île CpG 2 montrait une hyperméthylation (Fig. 6).

La méthylation des régions DMR Dlk1/Dio3 dans le testicule. a La méthylation de l'île CpG 1 dans les tissus témoins et traités. b La méthylation de l'île CpG 2 dans les tissus témoins et traités. c La méthylation de l'île CpG 3 dans les tissus témoins et traités

La méthylation des régions DMR Dlk1/Dio3 dans le poumon. a La méthylation de l'île CpG 1 dans les tissus témoins et traités. b La méthylation de l'île CpG 2 dans les tissus témoins et traités. c La méthylation de l'île CpG 3 dans les tissus témoins et traités

Discussion

L'utilisation croissante des nanomatériaux a soulevé des préoccupations quant aux impacts potentiels sur la santé humaine et l'environnement. Des études précédentes ont démontré que les NP de SiO₂ peuvent causer des dommages pulmonaires et cardiovasculaires, tels que l'inflammation pulmonaire et le dommage ischémique myocardique chez de vieux rats [21]. De plus, les nanoparticules peuvent avoir un effet sur les lignées germinales, car de telles cellules semblaient être plus sensibles aux effets toxiques des NP d'Ag et démontraient des effets indésirables suivant l'exposition à des doses plus faibles. L'exposition aux NP d'Ag a augmenté le nombre d'anomalies observées dans les cellules spermatogènes de rat et réduit l'intégrité à la fois de l'acrosome et de la membrane plasmique en plus de réduire l'activité mitochondriale [22]. Notre investigation fait partie d'une série d'études utilisant une plateforme expérimentale pour évaluer le potentiel des nanoparticules à cibler les organismes mâles et même leur descendance non exposée.

Dans notre précédente étude in vitro, nous avons rapporté qu'une exposition à court terme à certaines nanoparticules résulte en apoptose cellulaire et expression aberrante des gènes imprimés dans les cellules de Sertoli TM-4. Ces résultats démontrent que l'expression anormale des gènes imprimés peut être un mécanisme sous-jacent pour les nanoparticules d'induire une toxicité reproductive [23]. De plus, dans notre précédente étude in vivo, certains facteurs environnementaux, tels que les perturbateurs endocriniens, promeuvent aussi un phénotype ou état de maladie non seulement dans l'individu exposé mais aussi dans les générations successives de progéniture. Les épimutations dans la lignée germinale qui deviennent programmées de façon permanente peuvent permettre la transmission de phénotypes épigénétiques transgénérationnels [19]. Le but de cette étude était d'investiguer les changements faits à l'état épigénétique par le traitement NP de SiO₂ dans un modèle murin afin de poser les bases mécanistiques des effets transgénérationnels mâles.

L'état épigénétique est un terme utilisé pour définir les modifications chimiques qui se produisent dans un génome sans changer la séquence d'ADN [24]. Les mécanismes épigénétiques, incluant la méthylation de l'ADN, les gènes imprimés, les modifications d'histones et l'expression d'ARN non-codants, peuvent affecter la fonction génomique dans un environnement exogène [25]. À notre connaissance, notre étude est la première à investiguer les NP de SiO₂ induisant une toxicité pulmonaire et testiculaire au niveau épigénétique.

Nous avons d'abord examiné la toxicité aiguë des NP de SiO₂ dans les cellules A549, une lignée cellulaire épithéliale pulmonaire humaine. Cependant, nos résultats chez les souris expérimentales ont révélé une blessure dans les cellules épithéliales alvéolaires de type II et une blessure des crêtes mitochondriales testiculaires après contact avec les NP de SiO₂ à des concentrations environnementales [26]. Afin de mieux comprendre le mécanisme de la pathologie pulmonaire et testiculaire, nous avons exprimé les gènes imprimés. L'empreinte génomique fait référence au silence d'un allèle parental dans les zygotes de gamètes selon le parent d'origine ; ce silence se produit via des processus épigénétiques tels que la méthylation de l'ADN et/ou la modification d'histones [27]. Des études précédentes ont montré que l'expression des gènes imprimés au domaine Dlk1/Dio3 est importante pour la croissance fœtale [28], le timing de la puberté humaine [29] et la susceptibilité aux maladies métaboliques [30]. Des études ont suggéré que l'IG-DMR dicte le statut de méthylation allélique du promoteur DMR Gtl2, qui contrôle alors l'expression génique à travers toute la région Dlk1/Dio3 [17]. La fonction principale de cette région de contrôle imprimée est d'hériter la méthylation de l'ADN pilotée par les cellules germinales comme signal gamétique, et plus tard de maintenir les patrons subséquents de méthylation allélique spécifique dans les cellules somatiques [31]. Notre étude a démontré que les NP de SiO₂ induisent des changements à l'expression de la région Dlk1/Dio3 à la fois dans les tissus pulmonaires et testiculaires. Dans la région Dlk1/Dio3, les gènes exprimés paternellement (Dlk1, Rtl1 et Dio3) sont particulièrement anormaux comparés aux témoins après traitement NP. Les résultats de séquençage bisulfite affichent différents niveaux d'hypométhylation dans le poumon et le testicule. L'état de méthylation de l'IG-DMR est généralement plus bas dans les tissus traités, et cette hypométhylation peut représenter le mécanisme d'expression différentielle des gènes imprimés.

Conclusions

En conclusion, nos résultats indiquent que l'exposition aux NP de SiO₂ peut induire d'importants changements de méthylation de l'ADN qui déclenchent des dommages cellulaires et que ces changements sont hautement importants pour l'expression du cluster de gènes imprimés Dlk1/Dio3. Important, les changements de méthylation de l'ADN affectent à la fois les tissus pulmonaires et testiculaires. Ces résultats jouent un rôle important dans notre future recherche examinant les effets épigénomiques des nanoparticules hérités par la descendance de modèles exposés et la clarification des mécanismes moléculaires qui médient de telles altérations épigénétiques.

Abréviations

BALF :

Fluides de lavage bronchoalvéolaire (Bronchoalveolar lavage fluids)

CCK-8 :

Kit de comptage cellulaire-8 (Cell counting kit-8)

DMRs :

Régions différemment méthylées (Differentially methylated regions)

EGFR :

Récepteur du facteur de croissance épidermique (Epidermal growth factor receptor)

IG-DMR :

DMR intergénique (Intergenic DMR)

MPs :

Microparticules (Microparticles)

NPs :

Nanoparticules (Nanoparticles)